Морфология соединительной ткани печени и ее роль в патогенезе и морфогенезе хронического вирусного гепатита в и хронического алкогольного гепатита (авт

Взятие материала для исследования проведено в соответствии с морально-этических требований по биоэтике . Комиссией по биоэтике Ивано-Франковского государственного медицинского университета нарушений не выявлено (протокол № 10/06 от 17.04.2006). Распределение исследуемого материала представлен в таблице 1. Таблица 1 ? Распределение исследуемого материала по группам







Контрольная группа Хронический вирусный гепатит В Хронический алкогольный гепатит
Биопсийный материал Секционный материал Биопсийный материал Секционный материал Биопсийный материал Секционный материал
 — 20 15 20 10 35
Всего 100 случаев

Возраст больных и умерших в контрольной и исследуемых группах колебался от 22 до 77 лет. При этом средний возраст составлял — 48,53 года, из них у мужчин — 47,38 г., У женщин — 51,96 г. Подавляющее большинство больных (79%) была в возрасте от 22 до 60 лет, мужчин — 84%, женщин — 64%. 21% — больные пенсионного возраста. Соотношение между мужчинами и женщинами составляет 3: 1. Все случаи распределены нами на три группы: 1 группы — хронический вирусный гепатит В (35 случаев), из них мужчин — 22, женщин — 13. Средний возраст в группе составил — 45,31рик, у мужчин — 44,54р., У женщин — 46,61р. Из них 30 случаев (85,71%) — лица трудоспособного возраста. 2 группа — хронический алкогольный гепатит (45 случаев), из них мужчин — 40, женщин — 5. Средний возраст в группе составил 45,8 лет, у мужчин — 45,75 г., У женщин — 46,2р. 41 случай, а это 91,11% — лица трудоспособного возраста. Контрольную 3 группу (20 больных) составил секционный материал ткани печени, где смерть больных не была связана с каким-либо заболеванием пищеварительной системы.
Роллеты
В этой группе мужчин — 13, женщин — 7. Средний возраст составлял — 60,3 года, у мужчин — 57,23 г., У женщин — 66 лет. 40% (8 случаев) — лица трудоспособного возраста. Кроме того, было изучено и проанализировано 3674 протоколы вскрытий, проведенных на базе централизованного патологоанатомического отделения областной клинической больницы г... Ивано-Франковска за период с 1995 по 2004гг. Ткань печени для гистологического исследования получали путем пункционной и лапароскопической биопсии при первичном обращении больных, строго по определенным зонам, а также принимали кусочки печени при вскрытии умерших. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов нарастающей концентрации, заливали в парафин и готовили серийные срезы. Парафиновые срезы толщиной 5-7мкм окрашивали гематоксилином и эозином, Суданом ИИИ на жир, пикрофуксином по Ван-Гизону для обнаружения соединительной ткани печени, по Малори для выявления алкогольного гиалина и по методике Зербино для выявления фибрина и соединительной ткани. Исследование проведено микроскопом МБР-3 при различных увеличениях (окуляр 10 обґектив 10-20-40). При морфометрических исследовании печени определяли индекс гистологической активности воспалительного процесса в печеночной ткани с (RGKnodel et. al., 1981), критериями которого были степень воспалительной инфильтрации портальных трактов и характер некроза гепатоцитов (выраженность перипортального и интралобулярных некрозов) . Определяли также гистологический индекс склероза для оценки прогрессирования хронического гепатита с развитием цирроза за (Desmet et al., 1994). Методика ОЧГ (оранжевый — красный — голубой), что соответствует названиям основных красителей (оранжевый Ж, кислотный красный 2С и водный голубой) дает различную окраску фибрина в зависимости от его «возраста» («молодой» — оранжевый, «зрелый» — красный, «старый» — голубой), а также окрашивает соединительную ткань в синий цвет (ЗЕРБИНО Д. Д. и соавт., 1989). Для выявления клеток Ито, содержащие липидные включения, кусочки печени после фиксации в 10% забуференный формалине (16-24 часа) помещали в 1% раствор ОsО4 и 5% бихромата калия (в равных соотношениях) на 6 часов при комнатной температуре промывали в проточной воде (2:00), зневоднювалы в спиртах и ацетоне. Затем материал заливали в парафин и изготавливали срезы на обычном роторном микротоме (Логинов А. С. и соавт., 1985). Для электронно исследования кусочки печени фиксировали в растворе 1,6% растворе глютарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) на 1,5 часа при постоянном перемешивании при температуре +40. Затем кусочки промывали в 0,1 М фосфатном (рН 7,4) в течение 18-20 часов при температуре + 40С и фиксировали в 2% растворе тетроксид осмия (ОsО4) в течение 1,5 часов. Затем кусочки зневоднювалы в
серии спиртов возрастающей концентрации (30, 50, 70, 80, 96, 100) по 10 мин. с трехкратной сменой каждой порции, инкубировали в окиси пропилена (1час), выдерживали в смеси Эпона и окиси пропилена (соотношение 1: 1) в течение 1,5 часов, после чего содержали в смеси Эпоним при температуре 370С в течение 2-х часов. Кусочки помещали в полиэтиленовые капсулы, которые были заполнены свежей порцией смеси Эпоним и полимеризувалы при 600С в течение 24 часов. Изготовление смеси Эпоним из исходных компонентов, а также введение катализатора полимеризации ДМР-30 проводилась по Лафта. Полутонкой (1 мкм) и ультра тонкие (50 нм) срезы изготавливали на ультрамикротоми «LKB-8800 НЕ» (Швеция) с использованием стеклянных ножей. Полутонкой срезы монтировали на предметных стеклах и окрашивали в смеси, содержащей равные части 1% раствора метиленового синего и 1% раствора буры с последующей световой микроскопией. После выбора участка прицельно виточувалась «пирамида». Для улучшения качества изображения проводили двойное контрастирование ткани уранил ацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсом. Изучение ультраструктуры клеток печени проведено в электронном микроскопе «ПEM-125К» при ускоряющем напряжении 60-80кВ с последующим фотографированием на ядерные и диапозитивные пластинки при увеличении от 1000 до 40000. На электронограммах учитывали ряд морфологических критериев: размеры и форма (округлая, веретенообразная, треугольная, наличие отростков), структуру ядра, ядрышки. С помощью морфометрического исследования определяли показатели составляющих компонентов ткани печени — объемное содержание (%) гепатоцитов, соединительной ткани и клеточного инфильтрата при хроническом алкогольном, хроническом вирусном гепатитах по сравнению с контрольной группой. Для этого использовали 25-точечную сетку (Автандилов Г. Г., 1991, 2002), изображение которой проектировалось на профиль гистологического среза, что соответствовало одному полю зрения. Определяли объемную плотность клеток Ито — подсчитывали количество этих клеток на 1000 гепатоцитов в группах с хроническим вирусным В, хроническим алкогольным гепатитом и в контрольной группе. Статистические расчеты проводили по формулам, общепринятыми в количественной морфологии с получением показателя объемного содержания исследуемого компонента (М m,%). Вариационно-статистическую обработку полученных морфометрических результатов и вероятность расхождений между результатами показателей различных групп определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Виддминности считались статистически достоверными при уровне надежности 0,05 и выше. Обработка полученных результатов проведена с использованием программного обеспечения Microsoft Excel-2000.